兔血清總補體elisa試劑盒操作方法

　　兔血清總補體ELISA試劑盒是一種常見的實驗試劑盒，可以用于檢測血清中的總補體含量。在醫(yī)學(xué)、生物學(xué)和醫(yī)藥工業(yè)領(lǐng)域中廣泛應(yīng)用。
 
　　一、試劑盒組成
 
　　1. 酶標(biāo)板:一枚96孔ELISA酶標(biāo)板。
 
　　2. 標(biāo)準(zhǔn)樣品:兔血清補體標(biāo)準(zhǔn)溶液。
 
　　3. 洗滌緩沖液: 20倍濃度的洗滌緩沖液，用于洗滌酶標(biāo)板。
 
　　4. 加樣緩沖液: 10倍濃度的加樣緩沖液，用于稀釋血清等樣品。
 
　　5. 檢測抗體: 抗兔IgG辣根過氧化物酶標(biāo)記二抗。
 
　　6. 底物液: tetramethyl benzidine (TMB)顯色底物。
 
　　7. 停止緩沖液: 2mol/L硫酸，停止底物的顯色反應(yīng)。
 
　　二、試驗原理
 
　　兔血清總補體ELISA試劑盒是一種競爭性ELISA法。樣品中的總補體和免疫吸附板上的固定抗原競爭結(jié)合檢測抗體的酶標(biāo)記二抗。未結(jié)合的檢測抗體被洗去，添加底物后，檢測抗體上的酶標(biāo)記將被底物催化，使底物發(fā)生顯色反應(yīng)，得到顏色的強度與血清中總補體濃度成反比。
 
　　三、操作方法
 
　　1. 準(zhǔn)備涂層抗原溶液：將涂層抗原(血清補體標(biāo)準(zhǔn)溶液)稀釋至適當(dāng)濃度(建議500ng/ml)，加入96孔的酶標(biāo)板中，放置在4℃下過夜。
 
　　2. 樣品和標(biāo)準(zhǔn)品制備：樣品和標(biāo)準(zhǔn)品需用10倍的加樣緩沖液稀釋至合適濃度。
 
　　3. 加樣：將10ul的稀釋樣本分別加入微孔板孔中，每個孔分別加入200ul的稀釋后的檢測抗體。
 
　　4. 孵育：在37℃孵化1小時。
 
　　5. 洗滌：用洗滌緩沖液洗滌板孔4次，每次吸去液體后吸起余液，以避免固體物沉積于底部。
 
　　6. 染色：加入50ul的底物液，在室溫下靜置15min。
 
　　7. 停止反應(yīng)：加入50ul的停止緩沖液終止反應(yīng)，樣品變成黃色。
 
　　8.檢測測量：在450nm波長下，測量每個孔的OD值。
 
　　兔血清總補體elisa試劑盒在ELISA中，進(jìn)行各項實驗條件的選擇是很重要的，其中包括：
 
　　1、酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進(jìn)行初步效價的滴定(見酶標(biāo)記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統(tǒng)里地滴定其工作濃度。
 
　　2、酶的底物及供氫體的選擇：對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應(yīng)，而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用，應(yīng)注意防護(hù)。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后，應(yīng)加入強酸或強堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時間，以10-30分鐘為宜。底物使用液新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前加入。
 
　　四、結(jié)果分析
 
　　根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品法建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，通常將標(biāo)準(zhǔn)品的OD值作為Y軸，標(biāo)準(zhǔn)品中總補體的濃度作為X軸，利用標(biāo)準(zhǔn)曲線把樣本的OD值轉(zhuǎn)換成總補體濃度，得出樣本中的總補體濃度。
 
　　五、存儲方法
 
　　1.試劑盒應(yīng)貯存在4℃下，干燥避光處，有效期為12個月。
 
　　2.未開封的試劑盒中，如不含標(biāo)明冷凍于何處的冷凍品，則均須冷凍保存，凍存期不超過1年。
 
　　3.已開封的試劑盒中，可能存在供一次實驗的各個試劑用量不匹配、特殊情況下洗板的洗滌次數(shù)、緩沖液和標(biāo)準(zhǔn)品等物品的采樣后的使用均可能影響其穩(wěn)定性。因此，我們強烈建議我們客戶即使查詢珀金質(zhì)量保證書，也應(yīng)在實驗前檢查各個試劑是否結(jié)晶、物品是否在有效保質(zhì)期內(nèi)等是否正常，以保證試驗數(shù)據(jù)的可靠性。
 
　　總之，兔血清總補體ELISA試劑盒是一種簡單、敏感、特異的實驗試劑，可用于檢測血清中總補體含量，是生物醫(yī)學(xué)、生物學(xué)和醫(yī)藥工業(yè)研究中重要的實驗工具。